i Triterpene sul cancro alla Prostata

Corrispondenza a: Professor Guoqing Guo, Dipartimento di Anatomia, Medico College di Jinan University, 601 West Huangpu Road, Guangzhou, Guangdong 510630,P.R.Cina

E‑mail:tgqguo@yahoo.com

Parole chiave: Gandoderma lucidotriterpeni, carcinoma della prostata, metastasi, apoptosi

Riassunto

Gandoderma lucidoAll'interno della famiglia delle Polyporaceae di Basdiomicota, è un popolare farmaco tradizionale usato in Asia per promuovere la salute e la longevità.I composti estratti da G. lucido hanno rivelato antitumor, antiossidanti e effetti protettivi per fegato...G. lucidum è stato associato a cellule tumorali della prostata.Gli estratti di G. lucidum contengono numerosi componenti bioattivi; tuttavia, l'esatto monomero funzionale è sconosciuto e il ruolo dei triterpeni di G. lucidum (GLT) nel cancro alla prostata rimane oscuro.Il presente studio ha esaminato gli effetti di GLT sulla vitalità cellulare, migrazione, invasione e apoptosi nelle cellule tumorali della prostata umana di DU_.145.I risultati hanno dimostrato che una dose elevata (2 mg/ml) di GLT inibisce la vitalità cellulare in una dose‑e il tempo‑ dipende dalla regolazione delle metalloproteasi matrice.Inoltre, GLT ha indotto l’ apoptosi delle cellule DU_;145.In generale, GLT esercita il suo effetto sulle cellule tumorali attraverso numerosi meccanismi e può avere un potenziale uso terapeutico per la prevenzione e il trattamento del cancro.

Introduzione

Cancro della prostata è il tipo più comune di malignità e la seconda causa principale di cancro‑morte associate negli Stati Uniti (1).Le cellule tumorali della prostata reagiscono prima alla terapia di ablazione androgenica, ma a lungo‑termine anti‑trattamento androgene provoca perdita di reattività.I tipi di carcinoma della prostata possono infine svilupparsi come androgene‑indipendente con un comportamento marcatamente metastatico.Prostate cellule tumorali metastasi in altre parti del corpo umano; pertanto, il cancro alla prostata ha effetti deleteri sul tempo di sopravvivenza e la qualità della vita dei pazienti.Fino al 2007, ~80% dei pazienti che sono stati diagnosticati con cancro alla prostata hanno sviluppato metastasi ossee (2,3).Pertanto, la comprensione dei meccanismi molecolari alla base delle metastasi del cancro alla prostata è fondamentale per la prevenzione e la terapia delle metastasi del cancro alla prostata.

I composti farmaceutici estratti dai funghi hanno dimostrato benefici per il trattamento di una varietà di malattie, tra cui vari tipi di cancro, disturbi immunologici e malattie neurodegenerative (4_).Gandoderma lucidum, un fungo basidiomicetous, è un tipo di fungo che è stato ampiamente utilizzato come medicina tradizionale per migliaia di anni, in particolare in Asia (7).Una serie di sostanze chimiche bioattive, tra cui polisaccaridi, triterpenoidi e proteine, sono estratte dai corpi fruttiferi, micelia coltura e spore di G. lucidum (8).Precedenti studi hanno indicato che i composti attivi isolati dal suo corpo fruttificante ‘ Lingzhi᭘ partecipano a una varietà di processi biologici, tra cui anti‑ infiammatori, antiossidanti, antitumor e immunomodulatori (9_).Triterpeni isolati da G. lucidum (GLT) mostrano anche attività citotossiche contro il sarcoma del topo e le cellule del carcinoma polmonare del topo (14).

G. lucido è stato riferito inibire la metastasi di celle di cancro della prostata umane (15,16); comunque, perché gli estratti di G. lucidum contengono composti bioattivi numerosi, il composto funzionale esatto resta da esser chiarificato. Lo studio presente è stato compiuto per delucidare il ruolo di GLT su celle di cancro della prostata. Lo studio presente ha dimostrato che GLT considerevolmente ha inibito la vitalità di cella e ha indotto apoptosis in celle di cancro della prostata DU‑145 molto invasive. In aggiunta, GLT ha soppresso la migrazione e l'invasione via inibizione di matrice metalloproteinase (MMP) l'espressione.

Materiali e metodi

Cultura di cella e reagenti. Le celle di cancro della prostata di essere umano di DU‑145 sono state ottenute dalla Raccolta di Cultura di Tipo americana (Manassas, la Virginia, gli Stati Uniti). Le celle di DU‑145 sono state mantenute in F‑12 medio contenendo la penicillina (50 U/ml), la streptomicina (50 U/ml) e il siero bovino fetale del 10% (FBS; tutti da Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, Massachusetts, gli Stati Uniti) a 37˚C in un'incubatrice inumidita che contiene CO2 del 5%. GLT è stato acquistato da Nanjing Zhongke Pharmaceutical Co. Ltd. (Nanjing, Cina). Il componente principale di GLT è l'acido ganoderic H, con una purezza del ~99%. GLT è stato dissolto in dimethyl sulfoxide (DMSO; Sigma‑Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, la Germania) all'atto di una concentrazione di 40 mg/millilitro e immagazzinato a 4˚C (la concentrazione finale di DMSO nei controlli e GLT è stata <0.1% per escludere la sua tossicità). DMSO è stato usato come il controllo.

Capovolga la reazione a catena transcription‑polymerase (RT‑PCR). RNA totale è stato isolato da celle usando il reagente di TRIzol® (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). RNA è stato reverse‑transcribed l'utilizzazione di SuperScript il Primo Filo cDNA il sistema (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.), secondo il protocollo del fabbricante. I testi elementari seguenti sono stati usati per amplificazione di MMP‑2: testo elementare di Senso 5' ‑GTC CAC TGT TGG TGG GAA CT‑3' (senso) e 5' ‑CTC CTT DI CTG AAT GCC GAT GT‑3' (antisenso); le condizioni termoandanti in bicicletta sono state: 94˚C durante 2 min, seguiti da 30 cicli di 94˚C per 30 sec, 55˚C per 30 sec e 68˚C durante 1 min, allora 68˚C durante 10 min.

MMP‑9, 5' ‑GAC AAG AAG TGG GGC TTC TG‑3' (senso) e 5' ‑TCA BAVAGLIO DI AAG ACC TCC AGC TT‑3' (antisenso); le condizioni termoandanti in bicicletta sono state: 94˚C durante 2 min seguì da 30 cicli di 94˚C per 30 sec, 60˚C per 30 sec e 72˚C durante 1 min, allora 72˚C durante 10 min.

β ‑actin (controllo interno) 5' ‑CGA CTT DI AAC TAC CAA CTC CAT CA‑3' (senso) e 5' ‑CGG CGT DI LEGGE LEGGE di CAT CCT GCT‑3' (antisenso). Le condizioni termoandanti in bicicletta furono 94˚C durante 2 min seguiti da 30 cicli di 94˚C per 30 sec, 58˚C per 30 sec e 68˚C durante 1 min, allora 68˚C durante 10 min I prodotti PCR furono analizzati nel 2% agarose il gel electrophoresis e confermati dalle loro dimensioni adatte. L'immagine è stata presa con il sistema di analisi di formazione di immagini di gel e i valori di scala grigi sono stati analizzati usando il software ImageJ (V2.1.4.7; Istituti Nazionali di salute, Bethesda, Maryland, gli Stati Uniti). Gli esperimenti sono stati ripetuti tre volte.

Saggio di vitalità di cella. La vitalità di cella è stata determinata usando un saggio di MTT, secondo il protocollo del fabbricante (Promega Corporation, Madison, il Wisconsin, gli Stati Uniti). Brevemente, le celle di DU‑145 coltivate in 96‑well il piatto a una densità di 1x104/cm2 sono state trattate con 0,1, 0.5, 1 e GLT di 5 mg/millilitro per 24 h e con GLT di 2 mg/millilitro per 1, 2 e 3 giorni. Alla fine del periodo di incubazione, l'assorbimento è stato determinato usando un lettore di micropiatto a 570 nm.

Saggio di Wound‑healing. Le celle di DU‑145 sono state coltivate in 6‑cm i piatti fino a confluente e successivamente il monostrato è stato graffiato usando una punta di pipetta sterile eccellente per produrre una ferita stretta. Il mezzo e i rottami sono stati aspirati lontano e sostituiti con mezzo fresco alla presenza 0,1 e GLT di 2 mg/millilitro. Le immagini sono state prese prima e 6, 12 e 24 h dopo aver ferito l'utilizzazione di un Nikon TMS‑F phase‑contrast il microscopio (Nikon Instruments, Firenze, l'Italia).

Saggio di migrazione di Transwell...I test di migrazione con le cellule DU_; 145 sono stati eseguiti utilizzando un kit Transwell di BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA).Le cellule sono state rimosse dalle placche di coltura con tripsina e lavate due volte con PBS.Cellule (4x104) in 250 μ Il mezzo modificato di Dulbeco (DMEM) con o senza 0.1 e 2 mg/ml GLT sono stati collocati nella camera di invasione superiore e il vano inferiore è stato caricato con DMEM integrato con 10% FBS.La camera di migrazione cellulare è stata inserita nel vano inferiore e incubata per il 24 h alla 37˚C. Le celle sul lato superiore del filtro sono state rimosse con un tampone di cotone.Le cellule collegate al filtro sono state fissate con 100% metanolo per 10 min a temperatura ambiente.Le celle collegate al filtro erano macchiate con la macchia di Giemsa (5%) per 1 h a temperatura ambiente.I filtri sono stati eliminati dal lavaggio con acqua e il numero di cellule collegate al filtro è stato poi quantificato elencando le cellule nelle immagini catturate con un microscopio leggero dei filtri colorati.

Test di invasione transwell...Un saggio di invasione con le cellule DU_èstato eseguito utilizzando le camere di invasione BD BioCoat Matrigel (BD Biosciences), secondo il protocollo del costruttore.Le cellule DU‑145 sono state seminate in cellule 4x104 per bene nel siero‑ DMEM libero nel vano superiore, con o senza 0.1 e 2 mg/ml GLT, e DMEM integrato con 10% FBS è stato collocato nel vano inferiore della camera come chemoattractant.In seguito ad un'incubazione 24 h, le cellule non‑invadenti sul lato superiore della camera sono state rimosse e le membrane sono state fissate con 100% metanolo per 10 min a temperatura ambiente, lavate con PBS e macchiate con Giemsa macchia (5%) per 1 h a temperatura ambiente.Invasività è stata valutata contando le cellule di invasione sotto un microscopio leggero.

Flow citometric assay...Le cellule sono state lavate con ghiaccio‑freddo PBS, riemerse in 100 μl legante buffer (1% albumina sierica bovina (Thermo Fisher Scientific, Inc.) in PBS) e macchiate con fluoresceina isotiocianato (FITC)‑ annexin V (BD Biosciences).Le cellule sono state incubate per 15 min a 37 C nel buio.Successivamente, 200 μl buffer legante integrato con ioduro di propidio (PI; 20 μg/ml) è stato aggiunto immediatamente prima della citometria di flusso.Le cellule sono state analizzate utilizzando il citometro FASCanto e il software FASDiva (V.5.0.2; BD Biosciences).L'apoptosi precoce e tardiva è stata valutata.Cellule in apoptosi precoce e tardiva sono state contate.

Analisi statistica.I risultati sono presentati graficamente come l'errore medio ± errore standard della media di almeno tre esperimenti indipendenti.La significatività statistica delle differenze è stata analizzata utilizzando il test dello studente t‑test tra due gruppi e uno‑ analisi della varianza con Newman‑ Keull post‑ test ad hoc per confronti tra più di due gruppi.P<0.05 è stata considerata una differenza statisticamente significativa.

Risultati

L'estratto GLT inibisce la vitalità delle cellule tumorali della prostata in una dose‑ e il tempo dipendente modo...Per esaminare l'effetto dell'estratto GLT sulla vitalità cellulare, le cellule di DU coltivate‑145 sono state trattate con concentrazioni crescenti di GLT (0.1, 0.5, 1 e 5 mg/ml) e la vitalità delle cellule è stata determinata da un test MTT.Come indicato nella Fig. 1A, una bassa concentrazione di GLT (0.1 mg/ml) ha avuto un effetto minore sulla vitalità delle cellule DU‑145 rispetto al controllo (P>0.05).Una volta raggiunta la concentrazione.5 mg/ml, la vitalità delle cellule DU‑145 è stata significativamente inibita rispetto al controllo (P<0.05).Inoltre, come indicato in Fig. 1B, 2 mg/ml GLT ha inibito notevolmente la proliferazione delle cellule DU_; 145 a 24 h dopo il trattamento.In seguito, 2 mg/ml GLT è stato scelto come concentrazione di trattamento e 0.1 mg/ml GLT come ulteriore controllo per ulteriori esperimenti.

Figura 1...GLT inibisce la vitalità e la proliferazione delle cellule tumorali della prostata di DU_.145.(A) Le cellule DU‑145 sono state trattate con 0.1, 0.5, 1 e 5 mg/ml GLT per 24 h. La vitalità cellulare è stata determinata con un test MTT.(B) Le cellule di DU coltivate_sonostate trattate con 2 mg/ml GLT per 1, 2 e 3 giorni.I tassi di proliferazione sono stati determinati con un test MTT. *P<0.05 vs. control.GLT. Gandoderma lucido triterpene

Figura 2...Prove di guarigione.(A) Le cellule DU‑145 sono state graffiate con una punta di pipetta fine sterile per produrre una ferita stretta.Il mezzo e i detriti sono stati aspirati via e sostituiti con mezzo fresco in presenza di 0.1 e 2 mg/ml GLT o un volume uguale di mezzo fresco per il gruppo di controllo.Le immagini sono state catturate prima di 6, 12 e 24 h dopo i trattamenti.Scale bar, 20 μm. (B) Quantificazione dei risultati. *P<0.05 vs. control.GLT. Gandoderma lucido Triterpene.

Figura 3...Test di migrazione transwell e di invasione.DU‑145 celle sono state collocate nella camera di invasione superiore e il vano inferiore è stato caricato con DMEM contenente 10% FBS.La camera di migrazione cellulare è stata inserita nel vano inferiore e incubata a 37˚C per 24 h, con o senza somministrazione di GLT alle concentrazioni indicate.(A) Immagini rappresentative.(B) Sono state contate le cellule migrate.C) le celle DU‑145 sono state seminate a 4x104 cellule per bene nel siero‑ DMEM libero nel vano superiore, con o senza varie concentrazioni di GLT e 24 h dopo la raccolta delle cellule.Immagini rappresentative.D) Sono state conteggiate le cellule migrate. *P<0.05 vs control and 0.1 mg/ml groups.Scale bar, 20 μm. GLT, Gandoderma lucido Triterpene; DMEM, mezzo di aquila modificato di Dulceco.

GLT sopprime la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali della prostata. Il presente studio ha esaminato l'effetto di GLT sulla migrazione cellulare e sull'invasione.In primo luogo, è stato effettuato un test di guarigione.Come presentato in Fig. 2, le cellule del gruppo di controllo migrarono attraverso la ferita, che è stata guarita dopo 24 h; tuttavia, 2 mg/ml GLT ha inibito significativamente questo processo e 0.1 mg/ml GLT ha mostrato nessun effetto.Inoltre, la migrazione e l’invasione delle cellule sono state valutate utilizzando un sistema Transwell.Le cellule DU‑145 trattate con o senza GLT sono state autorizzate a migrare attraverso una membrana transwell in un mezzo completo.Le quantità equivalenti di cellule sono state trasferite alla superficie delle membrane e alla migrazione delle cellule sono state valutate entro 24 h. Rispetto al controllo o 0.1 mg/ml GLT‑ cellule trattate, 2 mg/ml GLT hanno portato ad un livello ridotto di migrazione delle cellule (Fig. 3A e B).Per valutare l'invasione cellulare, le cellule DU_sonostate placcate sulla superficie di Mategel.Come presentato in Fig. 3C e D, il trattamento con GLT di 2 mg/ml ha ridotto significativamente l'invasione cellulare di DU_.Inoltre, la migrazione/invasione‑geni associati, MMP, sono stati precedentemente implicati in metastasi del cancro alla prostata (17,18).Pertanto, sono stati esaminati il livello di espressione mRNA di MMP_eMMP_.Come riportato in Fig.4, i risultati di RT‑PCR ha indicato che 2 mg/ml GLT ha soppresso in modo significativo i livelli di espressione dei MMP.Questi risultati hanno rivelato che un'elevata dose di GLT ha inibito la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali della prostata attraverso la soppressione delle MMP.

GLT induce apoptosi di cellule tumorali della prostata. È stato esaminato se GLT è stato in grado di indurre l'apoptosi delle cellule tumorali della prostata.Il tasso di apoptosi è stato determinato da annexin V‑FITC e PI doppia colorazione.Rispetto al gruppo di controllo, la somministrazione di 0.1 mg/ml GLT non ha rivelato alcun effetto, mentre la velocità di apoptosi con il trattamento di 2 mg/ml GLT è stata notevolmente aumentata (Fig. 5).Questi risultati suggeriscono che GLT inibiva la vitalità, la migrazione e l'invasione, e induce anche l'apoptosi delle cellule tumorali della prostata in vitro.

Figura 5...GLT induce l’ apoptosi delle cellule DU_.145.Le cellule DU‑145 sono state trattate o meno con 2 mg/ml GLT per 24 h, quindi le cellule sono state sottoposte alla citometria di flusso.I tassi apoptotici sono stati analizzati. *P<0.05 vs. control.GLT. Gandoderma lucido triterpene; FITC, fluoresceina isotiocianato; PI, ioduro di propidio.

Discussione

I risultati del presente studio hanno dimostrato che GLT inibisce la crescita delle cellule tumorali della prostata, sopprime la migrazione e l'invasione e induce l'apoptosi attraverso l'inibizione dell'espressione MMP. La chiarificazione del meccanismo antitumorale sottostante GLT può contribuire all’uso clinico di composti attivi isolati da G. lucido.

G. lucido è stato utilizzato come medicina preventiva in Asia per secoli (19).Vari composti biologicamente attivi sono stati isolati da G. lucidocompresi polisaccaridi, fenoli, lipidi e triterpeni.Polisaccaridi possiedono caratteristiche antiossidanti (20), immunomodulanti (21) e antitumor (22).Inoltre, i polisaccaridi attivano la risposta immunitaria mediante la stimolazione della produzione di mediatori infiammatori (5,23).I fenoli hanno proprietà antiossidanti (24) e i lipidi sono in grado di inibire la crescita di epatoma e sarcoma (25). Triterpeni dimostrano citotossicità nei confronti dell’ epatoma, del cancro cervicale e delle cellule del carcinoma polmonare (26_).Oltre all’attività antitumor, GLT svolge un ruolo in una varietà di altri processi biologici, tra cui l’anti-8209; virus dell’immunodeficienza umana (HIV) e anti-8209; HIV‑1 attività proteasi (29,30), attività neuropatica (31) e attività anti-obesità (32).I risultati del presente studio hanno rilevato che GLT ha inibito le metastasi e indotto l’ apoptosi delle cellule tumorali della prostata.Questi risultati sono coerenti con quelli degli studi precedenti che hanno identificato l'effetto antitumorale della prostata G. lucido (15,16

Identificazione dei componenti biologicamente attivi di G. lucido è importante per la caratterizzazione meccanica della loro attività specifica e risultati del presente studio  ha inoltre rivelato che i triterpenes possono essere i composti attivi responsabile dell’ effetto antitumor di G. lucidum. Inoltre, vi è una certa evidenza che i componenti specifici dei prodotti naturali a base di erbe interagiscono tra loro per funzionare come tutto il prodotto (33).Il presente studio non ha identificato altri composti estratti da G. lucidoche richiede ulteriori indagini.

L'inibizione della vitalità di celle di cancro della prostata da GLT può esser causata dall'induzione di apoptosis. Apoptosis è un processo fisiologico dove le celle sono rimosse quando provano il danno di DNA critico (34,35). L'inibizione di apoptosis, piuttosto che la proliferazione di cella accresciuta, è particolarmente importante per lo sviluppo di cancro (36,37). I risultati dello studio presente hanno rivelato che GLT considerevolmente ha indotto apoptosis, confermato annettendo V tintura e flusso cytometry. Generalmente, l'apoptosis può esser diviso in stadi primi e tardi. Durante lo stadio tardo di apoptosis, la frammentazione di DNA succede in seguito a generazione di specie di ossigeno reattiva, caspase‑3 l'attivazione e la disfunzione mitochondrial (38). In aggiunta, l'apoptosis può esser diviso nei sentieri estrinseci e intrinseci. Il sentiero apoptotic estrinseco può esser iniziato da recettori di morte (39) e il sentiero intrinseco è anche chiamato il sentiero mitochondrion‑dependent (40). La maggioranza di stimoli induce apoptosis via il sentiero mitochondrial, che induce la membrana esterna mitochondrial permeabilization e questi processi sono regolati da membri della cella B lymphoma‑2 (Bcl‑2) la famiglia di proteina. Questa famiglia può esser suddivisa in pro‑apoptotic (Bcl‑2‑associated X proteina e sicario di antagonista omologo Bcl‑2), pro‑Bcl‑2 l'omologia 3‑only le proteine (compreso morte di dominio BH3‑interacting agonist, la proteina di Bcl‑2‑like 11 e il modulatore p53‑upregulated di apoptosis) e le proteine anti‑apoptotic [compreso Bcl‑2 e cella B lymphoma extra‑large (Bcl‑xL)] (35). I livelli di espressione diminuiti di proteine anti‑apoptotic e i livelli di espressione aumentati o l'attivazione di proteine pro‑apoptotic sono stati dimostrati per essere critici per l'induzione di apoptosis (35,41). Le celle di cancro della prostata di DU‑145 hanno aumentato livelli di espressione di Bcl‑2 e Bcl‑xL, proteggendo celle da apoptosis (42,43). I risultati dello studio presente hanno rivelato questo GLT ha indotto apoptosis; comunque, i meccanismi molecolari sottostanti specifici rimangono sotto indagine. I risultati dello studio presente hanno suggerito che GLT può diminuire l'espressione di proteine anti‑apoptotic e aumentare i livelli di espressione di o attivare, pro‑apoptotic le proteine, così inducendo la morte di cella.

I risultati del presente lo studio ha rivelato l'effetto di antitumore di GLT. L'amministrazione di GLT inibisce la proliferazione di celle di cancro della prostata umane e apoptosis indotto. Meccanismi dettagliati supplementari di segnalazione e in vivo gli studi sono tenuti a istituire GLT come un agente clinico potenziale per la prevenzione e/o la cura di cancro della prostata.

Ammissioni

Lo studio presente è stato sostenuto dai Fondi di Ricerca Fondamentali per le università Centrali (accordi no. 21615498), la Fondazione di Ricerca Scientifica Medica della Provincia di Guangdong (la borsa di studio no. A2015463) e l'amministrazione di Medicina cinese Tradizionale della Provincia di Guangdong, Cina (la borsa di studio no. 20151186).

Referenze 

1. Jemal A, Murray T, Samuels A, Ghafoor A, Ward E e Thun MJ: statistica di Cancro, 2003. Cancro di CA J Clin 53: 5‑26, 2003. 

2. Taichman RS, RD di Loberg, Mehra R e Pienta KJ: La biologia evolvente e la cura di cancro della prostata. J i Clin Fanno investimento 117: 2351‑2361, 2007. 

3. Norgaard M, Jensen AØ, Jacobsen JB, Cetin K, Fryzek JP e Sørensen HT: eventi imparentati scheletrici, metastasi di osso e sopravvivenza di cancro della prostata: Una coorte basata sulla popolazione studia in Danimarca (1999 a 2007). J Urol 184: 162‑167, 2010. 

4. Cheung WM, Hui WS, Chu PW, Chiu SW e Ip NY: l'estratto di Ganoderma attiva la MAPPA kinases e induce la differenziazione neuronal di celle di ratto pheochromocytoma PC12. Lettone di FEBS 486: 291‑296, 2000. 

5. Wang SY, Hsu ML, Hsu HC, Tzeng CH, Lee SS, Shiao MS e Ho CK: L'effetto anti‑tumor di Ganoderma lucidum è mediato da cytokines rilasciato da macrophages attivato e linfociti T. Intervallo J Cancro 70: 699‑705, 1997. 

6. Wasser SP e Weis AL: effetti terapeutici di sostanze che succedono in funghi di Basidiomycetes più alti: una prospettiva moderna. Il reverendo di critico Immunol 19: 65‑96, 1999. 

7. Ji Z, Tang Q, Zhang J, Yang Y, Jia W e Pan Y: immunomodulazione di RAW264.7 macrophages da GLIS, un proteopolysaccharide da Ganoderma lucidum. J Ethnopharmacol 112: 445‑450, 2007. 

8. Mizushina Y, Takahashi N, Hanashima L, Koshino H, Esumi Y, Uzawa J, Sugawara F e Sakaguchi K: acido di Lucidenic O e lactone, nuovi inibitori terpene di DNA eukaryotic polymerases da un basidiomycete, Ganoderma lucidum. Bioorg Med Chem 7: 2047‑2052, 1999. 

9. Ferreira IC, Heleno SA, Reis FS, Stojkovic D, Queiroz MJ, Vasconcelos MH e Sokovic M: caratteristiche chimiche di Ganoderma polysaccharides con antiossidante, antitumore e attività antimicrobiche. Fitochimica 114: 38‑55, 2015.

10. Lakshmi B, Ajith TA, Sheena N, Gunapalan N e Janardhanan KK: Antiperoxidative, anti‑inflammatory e attività antimutagenic di estratto di etanolo del mycelium di Ganoderma lucidum che succede in India Sud. Teratog Carcinog Mutagen (Suppl 1): S85‑S97, 2003.

11. Lin ZB e Zhang HN: Anti‑tumor e attività immunoregolatrici di Ganoderma lucidum e i suoi meccanismi possibili. Peccato di Acta Pharmacol 25: 1387‑1395, 2004.

12. Pan K, Jiang Q, Liu G, Miao X e Zhong D: estrazione di Ottimizzazione di Ganoderma lucidum polysaccharides e la sua immunità e attività di antiossidante. J Biol Macromol 55 internazionale: 301‑306, 2013.

13. Zhao W, Jiang X, Deng W, Lai Y, Wu M e Zhang Z: le attività di Antiossidante di Ganoderma lucidum polysaccharides e il loro ruolo su DNA si rovinano in topi indotti da cobalt‑60 gamma‑irradiation. Cibo Chem Toxicol 50: 303‑309, 2012.

14. Il LAUREATo IN SCIENZE di min, Gao JJ, Nakamura N e Hattori M: Triterpenes dalle spore di Ganoderma lucidum e il loro cytotoxicity contro meth‑A e celle di tumore LLC. Toro di Chem Pharm (Tokyo) 48: 1026‑1033, 2000.

15. Stanley G, Harvey K, Slivova V, Jiang J e Sliva D: Ganoderma lucidum sopprime angiogenesis attraverso l'inibizione di secrezione di VEGF e TGF‑beta1 da celle di cancro della prostata. Biochem Biophys Res Commun 330: 46‑52, 2005.

16. Jiang J, Slivova V, Valachovicova T, Harvey K e Sliva D: Ganoderma lucidum inibisce la proliferazione e induce apoptosis in celle di cancro della prostata umane PC‑3. J Oncol 24 internazionale: 1093‑1099, 2004.

17. Qi M, Liu Z, Shen C, Wang L, Zeng J, Wang C, Li C, Fu W, Sole Y e Han B: la sovraespressione di ETV4 è associata con prognosi povera in cancro della prostata: Coinvolgimento di uPA/uPAR e MMPs. Tumore Biol 36: 3565‑3572, 2015.

18. Sehgal I, Forbes K e Webb MA: secrezione ridotta di MMPs, plasminogen attivatori e TIMPS da celle di cancro della prostata derivate da metastasi ripetuta. Anticancro Res 23: 39‑42, 2003.

19. Shiao MS: prodotti naturali del fungo Ganoderma lucidum medicinale: Evento, attività biologiche e funzioni farmacologiche. Chem Rec 3: 172‑180, 2003.

20. Liu W, Wang H, Pang X, Yao W e Gao X: Caratterizzazione e attività di antiossidante di due low‑molecular‑weight polysaccharides purificato dai corpi fruiting di Ganoderma lucidum. J Biol Macromol 46 internazionale: 451‑457, 2010.

21. Bao X, Liu C, Fang J e Li X: studi strutturali e immunologici su polysaccharide principale da spore di Ganoderma lucidum (Fr). Karst. Carbohydr Res 332: 67‑74, 2001

22. Cao QZ e Lin ZB: Ganoderma lucidum polysaccharides peptide inibisce la crescita di cellula endoteliale vascolare e l'induzione di VEGF in cella di cancro ai polmoni umana. Vita Sci 78: 1457‑1463, 2006.

23. Wachtel‑Galor S, Choi SW e Benzie SE: l'Effetto di Ganoderma lucidum su DNA umano è la persona a carico di dose e mediato da perossido di idrogeno. Rappresentante di Redox 10: 145‑149, 2005.

24. Mau JL, Lin HC e Chen CC: proprietà di Antiossidante di parecchi funghi medicinali. J Agric cibo Chem 50: 6072‑6077, 2002.

25. Liu X, Yuan JP, Chung CK e Chen XJ: attività di antitumore dello sporoderm‑broken spore germinanti di Ganoderma lucidum. Lettone di cancro 182: 155‑161, 2002.

26. Ruan W, Wei Y e Popovich DG: risposte distinte di cytotoxic ganoderma lucidum triterpenoids in celle di carcinoma umane. Phytother Res 29: 1744‑1752, 2015.

27. Li P, Deng YP, Wei XX e Xu JH: Triterpenoids da Ganoderma lucidum e le loro attività cytotoxic. Nat Prod Res 27: 17‑22, 2013.

28. Cheng CR, Yue QX, Wu ZY, Canzone XY, Tao SJ, Wu XH, Xu PP, Liu X, Guan SH e Guo DA: Cytotoxic triterpenoids da Ganoderma lucidum. Fitochimica 71: 1579‑1585, 2010.

29. El Dine RS, El Halawany AM, CM di MA e Hattori M: Anti‑HIV‑1 proprendono in giro l'attività di lanostane triterpenes dal fungo Ganoderma colossum vietnamita. J Nat Prod 71: 1022‑1026, 2008.

30. Il LAUREATo IN SCIENZE di min, Nakamura N, Miyashiro H, Bae KW e Hattori M: Triterpenes dalle spore di Ganoderma lucidum e la loro attività inibitoria contro proburlone di HIV‑1. Toro di Chem Pharm (Tokyo) 46: 1607‑1612, 1998.

31. Zhang XQ, Ip FC, Zhang DM, Chen LX, Zhang W, Li YL, Ip NEW YORK e Voi WC: Triterpenoids con attività neurotrophic da Ganoderma lucidum. Nat Prod Res 25: 1607‑1613, 2011.

32. Lee I, Seo J, Kim J, Kim H, Youn U, Lee J, Jung H, Na M, Hattori M, Min B e Bae K: Lanostane triterpenes dai corpi fruiting di Ganoderma lucidum e i loro effetti inibitori su differenziazione adipocyte in 3T3‑L1 Celle. J Nat Prod 73: 172‑176, 2010.

33. Wilasrusmee C, Kittur S, Siddiqui J, Bruch D, Wilasrusmee S e Kittur DS: In vitro immunomodulatory effetti di dieci erbe comunemente usate su linfociti murine. J Altern complemento Med 8: 467‑475, 2002.

34. Goldar S, Khaniani SIG.A, Derakhshan SM e Baradaran B: meccanismi molecolari di apoptosis e ruoli in sviluppo di cancro e trattamento. Asiatico Pac J Cancer Prev 16: 2129‑2144, 2015.

35. Lopez J e Tait SW: Mitochondrial apoptosis: Assassinio di cancro usando il nemico dentro. Br J Cancer 112: 957‑962, 2015.

36. Chen D, Peng F, Cui QC, Daniel KG, Orlu S, Liu J e Dou QP: l'Inibizione di cancro della prostata l'attività proteasome cellulare da un pyrrolidine dithiocarbamate‑copper il complesso è associata con soppressione di proliferazione e induzione di apoptosis. Biosci 10 davanti: 2932‑2939, 2005.

37. Evan GI e Vousden KH: Proliferazione, ciclo di cella e apoptosis in cancro. Natura 411: 342‑348, 2001.

38. Yang Y, Kaul S, Zhang D, Anantharam V and Kanthasamy AG: la Soppressione di caspase‑3‑dependent proteolytic l'attivazione di proteina kinase C il delta da piccolo RNA interferente previene MPP ‑induced dopaminergic la degenerazione. Cella di Mol Neurosci 25: 406‑421, 2004.

39. Dickens LS, Powley IR, Hughes MA e MacFarlane M: Le ‘complessità ʼ di vita e morte: recettore di Morte piattaforme di segnalazione. Cella di Exp Res 318: 1269‑1277, 2012.

40. Tait SW e Green DR: Mitochondria e morte di cella: membrana esterna permeabilization e al di là. Nat reverendo Mol Cell Biol 11: 621‑632, 2010.

41. Vogler M, Walter HS e Tintore MJS: Puntamento di proteine di famiglia antiapoptotic BCL2 in patogenesi malignancies‑from ematologica a trattamento. Br J Haematol 178: 364‑379, 2017.

42. AM di Ibrado, Huang Y, Fang G, Liu L e Bhalla K: la sovraespressione di Bcl‑2 o Bcl‑xL inibisce l'attività di proburlone di Ara‑C‑induced CPP32/Yama e apoptosis di leucemia myelogenous acuta umana le celle di HL‑60. Cancro Res 56: 4743‑4748, 1996.

43. Lebedeva I, Rando R, Ojwang J, Cossum P e Boccale da birra in ceramica CA: Bcl‑xL in celle di cancro della prostata: Effetti di sovraespressione e down‑regulation su chemiosensibilità. Cancro Res 60: 6052‑6060, 2000